سیل کلچر میڈیم میں حیاتیاتی کیمیائی رد عمل جیسے کہ نئے خلیے کی ترکیب اور سیل میٹابولزم کے لیے درکار مادوں اور توانائی کو پورا کرنے کے لیے کافی غذائی اجزاء پر مشتمل ہونا چاہیے۔ سیل کلچر میڈیم کے اہم اجزاء پانی، امینو ایسڈ، وٹامنز، کاربوہائیڈریٹس، غیر نامیاتی نمکیات اور دیگر معاون غذائی اجزاء ہیں۔ لہذا، ہمیں سیل کلچر میڈیم کے نس بندی کے طریقہ کار اور روزانہ کے تجربات میں متعلقہ احتیاطی تدابیر پر توجہ دینی چاہیے۔
سیل ثقافت
1. مختلف سیل کلچر میڈیا کے لیے نس بندی کے طریقے اور احتیاطی تدابیر
سیل کلچر میڈیم کے نسبندی کے طریقوں کو آٹوکلیو نس بندی اور جھلی فلٹریشن نس بندی میں تقسیم کیا گیا ہے۔ مختلف ثقافتی ذرائع میں ان کے مختلف غذائی اجزاء کی وجہ سے نس بندی کے مختلف طریقے ہو سکتے ہیں۔
آٹوکلیو
کچھ میڈیا، جیسے MEM، کو آٹوکلیو کیا جا سکتا ہے، یہ میڈیا عام طور پر L-glutamine اور sodium bicarbonate پر مشتمل نہیں ہوتا ہے، اور عام طور پر میڈیا کو آٹوکلیو کیے جانے کے بعد شامل کیا جاتا ہے۔ اس کے علاوہ، ہائی پریشر گلوٹامیٹ (جیسے L-alanyl-L-glutamine) L-glutamine کی بجائے استعمال کیا جا سکتا ہے۔ آٹوکلیو ایبل میڈیم 121 ڈگری، 15 پی ایس آئی، اور 15 منٹ پر غذائی اجزاء کے کم سے کم نقصان کے ساتھ مکمل طور پر جراثیم سے پاک ہوتا ہے، بغیر نس بندی کے وقت میں توسیع کیے۔
زیادہ تر سیل کلچر میڈیا آٹوکلیونگ کے لیے موزوں نہیں ہیں۔ چونکہ کلچر میڈیم میں اکثر وٹامنز، پروٹینز، پولی پیپٹائڈس، نمو کے عوامل اور دیگر مادے ہوتے ہیں، اس لیے یہ مادے زیادہ درجہ حرارت یا تابکاری کی نمائش کے تحت فنکشن میں کمی یا نقصان کا شکار ہوتے ہیں، اس لیے اوپر بیان کردہ مائعات زیادہ تر فلٹر کیے جاتے ہیں اور بیکٹیریا کو ختم کرنے کے لیے جراثیم سے پاک ہوتے ہیں۔ فلٹریشن اور جراثیم کشی کے لیے بہت سے فلٹر میمبرینز دستیاب ہیں، اور ان کا مواد زیادہ تر PES، نایلان، پولی کاربونیٹ، سیلولوز ایسیٹیٹ، نائٹروسیلوز، PTFE، سیرامکس وغیرہ ہیں۔ میمبرین فلٹریشن سٹرلائزیشن فی الحال ایک عام استعمال شدہ اور آسان طریقہ ہے۔ 0.2 μm تاکنا سائز والی فلٹر جھلیوں کو اکثر استعمال کیا جاتا ہے، اور کچھ 0.1 μm تاکنا سائز کا استعمال کرتے ہیں۔ ہائی پریشر فلٹریشن کے مقابلے میں، جھلیوں کی عمر ہوتی ہے اور وہ زیادہ مہنگی ہوتی ہیں، لیکن سیل کلچر میڈیم میں موجود غذائی اجزاء کے لیے کم تباہ کن ہوتی ہیں۔
2. مختلف سیل کلچر میڈیا کو ذخیرہ کرنے کے دوران احتیاطی تدابیر
عام طور پر، مائع سیل کلچر میڈیم کو -20 ڈگری پر منجمد نہیں کیا جانا چاہئے، کیونکہ پگھلنے کے دوران غذائی اجزاء کو تیز کیا جا سکتا ہے، جو ثقافتی اثر کو متاثر کرے گا۔ عام حالات میں، اسے روشنی سے 2 ~ 8 ڈگری پر ذخیرہ کیا جانا چاہیے۔ استعمال کرنے سے پہلے اسے ریفریجریٹر سے باہر نکالیں اور توازن کے لیے کمرے کے درجہ حرارت پر رکھیں۔ عام مائع میڈیم 6 سے 12 ماہ تک درست ہے۔ مائع سیل کلچر میڈیم کے طویل مدتی اسٹوریج سے بچنے کی کوشش کریں۔ اس میں موجود گلوٹامین سٹوریج کے وقت کی توسیع کے ساتھ آہستہ آہستہ گل جائے گی۔ اگر سیل کی نشوونما اچھی نہیں ہے تو، آپ میڈیم میں گلوٹامائن کے مواد کی جانچ کرنے پر غور کر سکتے ہیں تاکہ یہ تعین کیا جا سکے کہ آیا گلوٹامین شامل کرنا ہے۔ . تجارتی طور پر دستیاب مائع سیل کلچر میڈیم کی ایک مخصوص میعاد ختم ہونے کی تاریخ ہوتی ہے۔ مائع تیار کرنے کے لیے خشک پاؤڈر سیل کلچر میڈیم استعمال کرنے کے بعد، اسے کم درجہ حرارت (2 ~ 8 ڈگری) پر بھی ذخیرہ کیا جانا چاہیے۔ درمیانے درجے میں گلوٹامین کی آسانی سے انحطاط کے علاوہ، درمیانے درجے کے دیگر اجزاء بھی بڑھتے ہوئے درجہ حرارت کے ساتھ انحطاط یا تیز ہو سکتے ہیں۔
