پی سی آر کا پتہ لگانا
پولیمریز چین ری ایکشن (PCR) ڈی این اے کے ایک ٹکڑے کو بطور ٹیمپلیٹ استعمال کرتا ہے، اور ڈی این اے پولیمریز اور نیوکلیوٹائڈ سبسٹریٹ کی شمولیت سے، ڈی این اے کو ساختی اور فعال تجزیہ کے لیے کافی مقدار میں بڑھا دیا جاتا ہے۔ بیکٹیریل متعدی بیماریوں کی طبی تیزی سے تشخیص میں پی سی آر کا پتہ لگانے کا طریقہ انتہائی اہم ہے۔
پی سی آر کا اصول قدرتی ڈی این اے کی نقل کے عمل کی طرح دو معلوم ترتیبوں کے درمیان واقع ڈی این اے کے ٹکڑے کو بڑھانے کے لیے استعمال کیا جاتا ہے۔ ڈی این اے مالیکیول جس کو بڑھانا ہے اسے ایک ٹیمپلیٹ کے طور پر استعمال کیا جاتا ہے، اور ٹیمپلیٹ کے 5'؛ end اور 3'؛ اختتام کے تکمیلی oligonucleotide ٹکڑوں کا ایک جوڑا پرائمر کے طور پر استعمال ہوتا ہے۔ ڈی این اے پولیمریز کی کارروائی کے تحت، یہ نصف محفوظ نقل کے طریقہ کار کے مطابق ٹیمپلیٹ کی پیروی کرتا ہے۔ نئے ڈی این اے کی ترکیب کی تکمیل تک سلسلہ کی توسیع، اس عمل کو دہرائیں، ہدف ڈی این اے کے ٹکڑے کو بڑھایا جا سکتا ہے۔
(PCR) وٹرو میں مخصوص ڈی این اے کے ٹکڑوں کو انزیمیٹک طور پر ترکیب کرنے کا ایک طریقہ ہے۔ یہ اعلی درجہ حرارت کی کمی، کم درجہ حرارت اینیلنگ، اور مناسب درجہ حرارت کی توسیع کے کئی مراحل پر مشتمل ہے۔ اعلیٰ حساسیت، آسان آپریشن، اور وقت کی بچت جیسی خصوصیات۔ اسے نہ صرف بنیادی تحقیق جیسے جین آئسولیشن، کلوننگ اور نیوکلک ایسڈ کی ترتیب کے تجزیہ میں استعمال کیا جا سکتا ہے بلکہ بیماریوں کی تشخیص یا کسی بھی ایسی جگہ جہاں ڈی این اے اور آر این اے موجود ہو، میں بھی استعمال کیا جا سکتا ہے۔ پولیمریز چین ری ایکشن (Polymerase Chain Reaction، PCR مختصراً) سیل فری مالیکیولر کلوننگ یا وٹرو پرائمر ڈائریکٹڈ انزیمیٹک ایمپلیفیکیشن ٹیکنالوجی میں مخصوص DNA ترتیب کے نام سے بھی جانا جاتا ہے۔
ڈی این اے کی نیم محفوظ نقل حیاتیاتی ارتقاء اور گزرنے کا ایک اہم طریقہ ہے۔ دوہری پھنسے ہوئے ڈی این اے کو مختلف قسم کے انزائمز کے عمل کے تحت ایک ہی اسٹرینڈ میں ڈینیچر کیا جا سکتا ہے اور پگھلایا جا سکتا ہے۔ ڈی این اے پولیمریز اور ایک پروموٹر کی شرکت کے ساتھ، دوہرے پھنسے ہوئے ڈی این اے کو تکمیلی بنیاد کی جوڑی کے اصول کے مطابق ایک ہی دو مالیکیولز میں نقل کیا جا سکتا ہے۔ تجربات میں، یہ پایا گیا کہ ڈی این اے کو زیادہ درجہ حرارت پر بھی ڈینیچر کیا جا سکتا ہے اور پگھلا بھی جا سکتا ہے، اور درجہ حرارت کم ہونے پر اسے دوبارہ دوہرے کناروں میں تبدیل کیا جا سکتا ہے۔ لہٰذا، درجہ حرارت کی تبدیلیوں کے ذریعے ڈی این اے کی تزئین و آرائش کو کنٹرول کرکے، اور پرائمر کو پروموٹر کے طور پر ڈیزائن کرکے، ڈی این اے پولیمریز اور ڈی این ٹی پیز کو شامل کرکے مخصوص جینز کی ان وٹرو نقل کو مکمل کر سکتے ہیں۔
سادہ نکتہ یہ ہے کہ خصوصی آلات استعمال کریں، dNTPS، Mg2+، مخصوص پرائمر، DNA پولیمریز، اور بفر سسٹم استعمال کریں، ٹیمپلیٹ شامل کریں، جو کہ وٹرو ایمپلیفیکیشن کے لیے DNA نمونہ ہے، اور الیکٹروفورسس انجام دیں۔ اگر اسے بڑھایا جا سکتا ہے، اور ایمپلیفائیڈ پروڈکٹ کا سائز ہدف کے بینڈ کے مطابق ہے، تو اس کا مطلب ہے کہ پرائمر اور ٹیمپلیٹ مخصوص ہیں، اور پتہ لگانے کا انڈیکس مثبت ہے۔
پی سی آر نیوکلک ایسڈ کا پتہ لگانے کے طریقے اور اقدامات
نیوکلک ایسڈ کی جانچ کے لیے پانچ مراحل کی ضرورت ہوتی ہے: نمونے لینے، نمونے کو برقرار رکھنا، برقرار رکھنا، نیوکلک ایسڈ نکالنا، اور کمپیوٹر ٹیسٹنگ۔
نیوکلک ایسڈ کا پتہ لگانا
پہلا قدم انسانی رطوبتوں کو جمع کرنا اور ناک کی گہا یا گردن کی پچھلی دیوار اور دو طرفہ فارینجیل ٹانسلز کو ناک ٹیسٹ یا فارینکس ٹیسٹ کے ساتھ صاف کرنا ہے۔
دوسرے مرحلے میں، طبی عملے نے نمونہ رکھا، ٹیسٹ پیس ہیڈ کو سیل پرزرویشن سلوشن میں ڈبو دیا، اور دم ٹوٹنے کے فوراً بعد ٹیوب کی ٹوپی کو خراب کر دیا۔
تیسرے حصے میں، نمونے کو ایک ایئر ٹائٹ بیگ میں ڈالیں، اسے رکھیں اور وقت پر معائنہ کے لیے بھیج دیں۔
چوتھا مرحلہ نیوکلک ایسڈ نکالنے کے لیے نمونے کو لیبارٹری میں بھیجنا ہے۔
پانچویں مرحلے میں، نچوڑ کو فلوروسینٹ پی سی آر ایمپلیفیکیشن ری ایکشن کا نشانہ بنایا جاتا ہے۔
کچھ استعمال کی اشیاء اور آلات کی بھی ضرورت ہے۔
پی سی آر انسٹرومنٹ، پی سی آر ٹیوب، پپیٹ ٹپ، ڈیپ ویل پلیٹ، ریزروائر، اور ریجنٹس شامل کیے گئے
