سیل کلچر پلیٹیں عام طور پر سیل کلچر کے تجربات میں استعمال ہونے والی اور اہم استعمال کی جاتی ہیں کیونکہ وہ سیل کے تجربات کے لیے وقت اور ری ایجنٹ مواد کو بچا سکتی ہیں، اور مشاہدے اور پتہ لگانے میں آسانی کے لیے ایک ہی وقت میں متعدد متحرک متغیرات کو ترتیب دے سکتی ہیں۔
ثقافت پلیٹ
1. 96، 24- ویل کلچر پلیٹوں یا پیٹری ڈشز کے ڈھکن بہت ڈھیلے ہوتے ہیں، جو ہوا کے لیے آسان ہیں، لیکن کیا بیکٹیریا، مولڈ اور دیگر آلودگی بھی اس میں پھسل جائیں گے؟
جواب: (1) غلاف بہت ڈھیلا ہے اور نیم کھلے کلچر سے تعلق رکھتا ہے۔ اس کا مقصد سانس لینا ہے (دراصل، درمیانے درجے کی pH قدر کو برقرار رکھنے کے لیے کلچر ڈش کے باہر CO2 کو کلچر ڈش کے ساتھ مکمل طور پر تبدیل کرنے کے قابل بنانا)۔
(2) اس کے فوائد اور نقصانات ہیں، جس سے آلودگی کا امکان بڑھ جاتا ہے۔ اس کے علاوہ، اس کی وجہ سے پیٹری ڈش میں موجود مائع بخارات بن جاتا ہے، جو کہ ادویات کی درست خوراک کے لیے قابل ذکر ہے۔ اس لیے درج ذیل دو اقدامات ضروری ہیں۔
ا) انکیوبیٹر میں ہوا صاف ہونی چاہیے (باقاعدہ الٹرا وائلٹ لائٹ، الکحل اسکربنگ، اور انکیوبیٹر کو جتنا ممکن ہو کم آن اور آف کیا جانا چاہیے)
ب) انکیوبیٹر میں نمی کو ہر وقت 100 فیصد پر برقرار رکھا جانا چاہیے (ایک سنک جس میں جراثیم سے پاک پانی کو انکیوبیٹر میں رکھا جاتا ہے)۔ سیپٹک آپریشن پر توجہ دینا!
2. میرے خلیوں کو کلچر پلیٹ پر ٹیکہ لگایا جاتا ہے، اور خلیے ہمیشہ پردیی حصے میں جمع ہوتے ہیں۔ میں کیا کروں؟ میں دیکھ رہا ہوں کہ کچھ ساتھیوں کے بازوؤں کے خلیے درمیان میں جمع ہیں۔ کیا یہ پلیٹ کے معیار کا مسئلہ ہے؟
A: آپ اپنے خلیات کو کیسے ملاتے ہیں؟ کیا یہ پائپیٹ اڑا رہا ہے یا کلچر پلیٹ کو ہلا رہا ہے؟ اگر یہ بعد میں ہے، اور اسے دائرے میں ہلایا جاتا ہے، تو اس بات کا بہت امکان ہے کہ خلیات سینٹرفیوگل فورس کی وجہ سے ارد گرد کے حصے میں پھینکے جائیں گے، جس کے نتیجے میں خلیات کے درمیانی حصے میں آ جائیں گے۔ کم، چار ہفتے سے زیادہ! آپ اسے خود آزما سکتے ہیں!
ایک اچھا طریقہ: سیڈ پلیٹ کو کاشت کرنے سے پہلے، کلچر پلیٹ کو انکیوبیٹر میں چند گھنٹوں کے لیے رکھیں اور پھر اسے باہر نکال لیں۔ خلیات کو بیج کرتے وقت، قوت ہلکی ہونی چاہیے۔ آپ کلچر پلیٹ ہول کی طرف ایک ڈریپر استعمال کر سکتے ہیں آہستہ آہستہ شامل کریں تاکہ سیل معطلی کو پلیٹ کے کنوؤں میں بہنے دیا جائے، اور کلچرڈ سیل کافی حد تک یکساں طور پر بڑھتے ہیں۔ یاد رکھیں کبھی بھی آسکیلیٹر کو نہ ہلائیں ورنہ آپ کے خلیے آپس میں جمع ہو جائیں گے جیسا کہ آپ نے کہا تھا۔
3. میرے خلیات عام طور پر گزر جاتے ہیں، لیکن جب ایک قسم چھ کنویں پلیٹ میں جاتی ہے (منشیات کے اضافے اور کنٹرول سے قطع نظر)، وہاں ہمیشہ دو یا تین کنویں (بے ترتیب) خلیے ہوتے ہیں جو اچھی طرح سے نہیں بڑھتے، چھوٹے ہوتے ہیں، اور نظر آتے ہیں۔ ٹوٹ جانا کیا کسی نے اس کا سامنا کیا ہے؟ کیا وجہ ہے؟
A: یہ آپ کے شامل کردہ مائع کے درجہ حرارت سے متعلق ہوسکتا ہے۔ اگر آپ کے خلیات کو ابھی میڈیم کو تبدیل کرنے اور میڈیم شامل کرنے کے لیے نکالا گیا ہے، اور میڈیم کو بھی جلد ہی 4 ڈگری ریفریجریٹر سے نکال لیا جائے گا، تو خلیوں کے منجمد ہو کر موت کے منہ میں جانا آسان ہے۔ یہ سفارش کی جاتی ہے کہ آپ سب سے پہلے 15 منٹ تک انکیوبیٹر میں میڈیم کو انکیوبیٹ کریں۔
اس کے علاوہ، یہ آپ کے خلیات کی ترقی کی حالت سے بھی متعلق ہے. خوراک سے پہلے کے خلیات کو سیرم کی زیادہ مقدار کے ساتھ انکیوبیٹ کیا جا سکتا ہے۔ یقینی بنائیں کہ خلیات اچھی حالت میں ہیں۔
یا اسے 37-ڈگری پانی کے غسل میں سینکایا جا سکتا ہے، یا خود کلچر پلیٹ کا مسئلہ ہے، آپ کوئی اور کلچر پلیٹ آزما سکتے ہیں۔ ایک اور امکان سیل کی حالت کا مسئلہ ہے، پلیٹ کو بوتے وقت سیرم کی حراستی کو ایڈجسٹ کریں۔
4. حالیہ دنوں میں، میں نے خلیات کو ٹیکہ لگانے کے لیے چھ کنویں والی کلچر پلیٹ کا استعمال کیا۔ 24 گھنٹے تک کلچر کرنے کے بعد، میں نے میڈیم تبدیل کیا۔ میڈیم کو تبدیل کرنے سے پہلے، میں نے مشاہدہ کیا کہ خلیات دیوار کے ساتھ لگے ہوئے ہیں، اور حالت بہت اچھی تھی۔ میڈیم تبدیل کرنے کے بعد، میں نے فوری طور پر خوردبین کا استعمال کیا۔ یہ دیکھا گیا کہ ہر کنویں کے تقریباً آدھے خلیے قریب قریب موت کی حالت کو ظاہر کرتے ہیں۔ خلیے بہت چھوٹے ہو جاتے ہیں اور بہت زیادہ ملبہ پیدا کرتے ہیں، جب کہ باقی آدھے خلیے نارمل ہوتے ہیں، غیر معمولی خلیات اور نارمل خلیات کے درمیان واٹرشیڈ ہوتا ہے، اوپر کا نصف دائرہ اچھا ہوتا ہے، نیچے کا نصف دائرہ اچھا نہیں ہوتا، کیسے؟ یہ؟ کیا معاملہ ہے؟
A: آپ دیکھ سکتے ہیں کہ آیا مندرجہ ذیل وجوہات میں سے کوئی بھی ہے۔
a ثقافتی پلیٹ کو افقی طور پر نہیں رکھا گیا ہے۔
ب آپ کے کلچر میڈیم کے بارے میں کیا خیال ہے، اگر کلچر میڈیم ختم ہو جاتا ہے تو خلیے اس پر عمل نہیں کریں گے۔ ایک تازہ تیار میڈیم آزمائیں۔
c یہ پلیٹ کا مسئلہ ہو سکتا ہے۔ کسی دوسرے برانڈ کی پلیٹ تبدیل کرنے یا کلچر کی بوتل استعمال کرنے میں کوئی حرج نہیں ہے۔
ڈی کیا آپ نے میڈیم کو تبدیل کرتے وقت پنکھے کے اثر و رسوخ پر توجہ دی، خاص طور پر جب بہت سی کلچر پلیٹیں ہیں جنہیں تبدیل کرنے کی ضرورت ہے، ہوا اور پانی کی کمی کی وجہ سے خلیات کو سکڑنا اور پھٹ جانا آسان ہے۔ اگر ایسا ہے تو، میڈیم کو ایک ایک کرکے تبدیل کیا جانا چاہئے، اور پائپیٹ کو ضائع کرنے سے نہ گھبرائیں، آپریشن کی کارکردگی پر توجہ دیں!
5. خلیات کو ہضم ہوئے اور ایک 24-کنویں کی پلیٹ میں ٹیکہ لگائے ہوئے چار دن ہوئے ہیں، اور ہر کنویں کا درمیانی حصہ ہمیشہ بھرا رہتا تھا۔ میڈیم کو ہر روز پی بی ایس کے ساتھ دھویا جاتا تھا، اور یہی صورت حال اس وقت پیش آئی جب اگلے دن میڈیم تبدیل کیا گیا۔ کنارے اچھی طرح لمبے ہیں اور مرکز مردہ خلیوں سے بھرا ہوا ہے؟
جواب: اگر خلیے ارد گرد گھنے اور درمیان میں ویرل ہوں تو اس کی تقریباً درج ذیل وجوہات ہیں:
میڈیم بہت کم شامل کیا گیا تھا۔ بنیادی طور پر مائع تناؤ کے مسئلے کی وجہ سے۔
آیا انکیوبیٹر کے نیچے پانی کم ہے؛
سیل سیڈنگ کے بعد ہلنا بہت زیادہ تھا۔ خلیات سینٹرفیوگل فورس کی وجہ سے چاروں طرف تقسیم ہوتے ہیں۔
خلیات کو یکساں طور پر تقسیم کرنے کی کلید یہ ہے کہ ہر قسم کے خلیے میں انفرادی فرق ہوتا ہے، اور دوسرے لوگوں کے خلیے کی کارروائیاں آپ کے لیے موزوں نہیں ہوسکتی ہیں۔ لہذا آپ کو خود ہی دریافت کرنا ہوگا اور قواعد کا ایک مجموعہ تلاش کرنا ہوگا جو آپ کے اپنے خلیوں کے لیے منفرد ہوں۔ آپ کو درج ذیل تجربہ ہے:
(1) سیڈ کرنے کے لیے تمام سیل سسپنشنز کو بیج بونے سے پہلے پائپیٹ کے ساتھ ملا دینا چاہیے۔
(2) ریکارڈ کے مطابق، 24- ویل پلیٹ کا مائع حجم 1ml ہے، درحقیقت، 1ml کا حجم کافی ہے۔
(3) ٹیکہ لگاتے وقت، نمونہ آہستہ آہستہ شامل کریں، اور پپیٹ کی نوک کو تھوڑا سا گھمانا یاد رکھیں۔ ایک نمونہ کے اضافے کے مقام پر خلیات کو جمع ہونے سے بچانے کے لیے نمونے کو زیادہ تیزی سے شامل نہیں کیا جا سکتا، اور مختلف حصوں میں نمونے شامل کرنے پر توجہ دیں، یعنی حرکت پذیر بندوق کو شامل کرتے وقت۔ سر، مصنوعی طور پر خلیات کو یکساں طور پر تقسیم کرنے کا رجحان رکھتے ہیں۔ ایسا کرنے سے خلیات کو یکساں طور پر تقسیم کرنے کا اثر پڑتا ہے۔